免疫渗滤，也称为垂直流向或横向流动免疫测定，其实就是半干斑点印迹。通过小型化设计和一定程度的整合，减小了样本和试剂的体积，可以在简易的一次性设备中进行测定。反应膜放置在吸收垫上部。当在膜上加入试剂时，试剂会被吸收剂吸收，吸收剂充当测试过程中使用的所有液体的吸收剂槽。

免疫渗滤的优缺点

与侧向流免疫测定相比，免疫渗滤的整合程度要小得多。因此更容易进行开发和生产，还可以避开一些重要的免疫诊断测定专利。而且可以更容易开发多分析物检测技术，因为膜上捕获分子的空间位置与侧向流测定中的分析动力学无关。

另一方面，由于整合程度较低，一般需要更复杂的测定处理方案。可能需要多次添加试剂。通常第一步加入样本，第二步加入检测试剂，例如胶体金偶联物。酶联检测系统也可能需要添加底物。有时还需要离线样品制备步骤。结果读取和解读可能不太明确，可能会让没有经验的用户感到困惑。

硝酸纤维素反应膜

在免疫渗滤中，液体垂直通过反应膜，因此膜的过滤特性比毛细管上升时间更重要。原则上，可以使用蛋白吸附度高且一致的所有膜类型。然而，由于与侧向流免疫测定相同的原因 — 润湿性、易于捕获蛋白质、易于封闭和可靠性 — 硝酸纤维素同样是最常用的材料。可以使用 BA83、BA85 等小孔径无载体膜；这种膜是高灵敏度小孔径膜，具有表面积大和蛋白吸附能力强等特点。但是封装时必须格外小心，应确保膜和吸收剂之间良好接触，以提供良好的流动性。

主要考虑因素：

• 孔径：孔径越小，可用于承载偶联物的表面积就越大，因此蛋白吸附能力就越高。然而，这样会导致流速较慢
• 背衬为膜增加了机械支撑。根据样品的机械负载情况，可能使用无背衬膜就已足够。

Whatman™ 的优点

• 推荐使用的 Whatman™ 膜是专为垂直流向免疫测定而制造，以消除毛细管上升产生的问题。
• 小孔结构的非特异性吸附低，灵敏度更高，检测结果更精确。
• 100% 纯硝酸纤维素提供高结合载量。

技术规格

膜

吸收垫

吸收垫在免疫渗滤中的功能与侧向流测定中的功能有很大不同。吸收垫必须与反应膜的整个下表面紧密接触，以确保均匀流动。这对于确保信号发展的一致性很有必要。通常需要依次添加具有不同特性的不同试剂。添加的溶液总体积可能非常大。通常需要具有较快爬速和非常高吸水能力的厚纤维素材料。

主要考虑因素：

在免疫渗滤中，吸收垫最重要的参数是其吸水能力。吸收垫必须能够吸收在测定过程中添加的所有液体。因此，测试开发人员必须选择一个至少能够容纳如此数量液体的吸收垫。在极端情况下，可能需要使用一摞吸收垫。

免疫渗滤的吸收介质必须具有高爬速和高吸水性。流通式测定中使用的液体量可能比侧向流动中的液体量高得多。因此，具有高爬速的厚纤维素材料是首选。

Whatman™ 的优点

• 100% 纯纤维素，具有高爬速和高吸水性。
• 有多种厚度可供选择，适用于大多数的免疫渗滤测定。

吸收剂

获取样品或联系专家