补救措施

蛋白与其他物质共同洗脱

• 优化运行条件以提高分辨率
• 运行前后检查用于测定的缓冲液条件
• 检查选择的填料

同一层析柱存在上一次运行的交叉污染

• 使用推荐的程序清洁
• 纯化多种抗体时，请使用填充有 MabSelect PrismA™ 的层析柱。（可使用 NaOH CIP*）

补救措施

样本的 pH 值或缓冲条件不正确

• 使用填充有 Sephadex™ G-25 的脱盐柱，将样本转入正确的缓冲液

层析柱在缓冲液中未充分平衡

• 重复或延长平衡步骤直到电导率和/或 pH 值恒定

层析柱内出现微生物生长

• 不使用时，按照清洁程序进行清洁，并将其存放在 20% 的乙醇中

从 IMAC* 填料中剥离金属离子

• 使用填充有 Sephadex™ G-25 的脱盐柱，以清除样本中的金属离子剥离剂，或使用填充有 Ni Sepharose™ excel 填料（如 HisTrap™ excel）的层析柱

超出填料结合载量

• 填充更大的层析柱
• 使用 HiTrap™ 层析柱时，最多可串联三个层析柱。

补救措施

层析步骤前后使用的测定条件不同

• 所有测定的条件必须相同

分离过程中去除了抑制剂

• 测量活性之前，采用填充有 Sephadex™ G-25 的脱盐柱或透析原始样本，因为细胞裂解物和提取物通常含有会影响活性的低分子量物质

补救措施

蛋白被蛋白酶降解

• 向样本和缓冲液中添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白酶解
• 通过 Benzamidine Sepharose™ 4 FF 填料 (high sub) 等填料运行样本，以去除胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶

样本制备过程中，蛋白被吸附到过滤器

• 使用其他类型的蛋白吸附率低的过滤器（例如，用于 ÄKTA™ 系统的 Protein Prep）

蛋白沉淀

• HIC：检查盐度条件；调整以提高溶解度
• IEX：检查 pH 值和盐度条件；调整以提高溶解度

发生了疏水相互作用

• IEX：添加变性剂、极性降低剂或去污剂。在运行缓冲液中加入 10% 乙二醇以防止疏水相互作用
• SEC、AC*：添加变性剂、极性降低剂或去污剂

对填料的非特异性吸附

• IEX：降低盐浓度以最小化疏水相互作用。添加合适的去污剂或有机溶剂（例如，5% 异丙醇）
• SEC：增加缓冲液中的盐浓度，最高可达 300 mM 氯化钠

蛋白未洗脱

• HIC：考虑使用添加剂来减少疏水相互作用，或使用疏水性较低的填料
• AC：采用竞争洗脱模式时，增加洗脱缓冲液中竞争剂（例如咪唑）的浓度

补救措施

缓冲液中的蛋白不稳定或无活性

• 确定蛋白的 pH 值和盐稳定性
• 加入添加剂以稳定目标蛋白

酶与辅助因子或其他必要成分分离

• 通过汇集馏分中的等分试样并重复测定来进行测试