您是否因为纯度较高的蛋白数量未达预期而感到沮丧?无需担心!
例如,如果蛋白回收率高于预期,则可能是由蛋白与其他物质共同洗脱造成的。
如果吸附效果不理想,则样本的 pH 值可能不正确。
回收率低于预期,这可能意味着蛋白被蛋白酶降解。
Cytiva R&D 蛋白纯化专家总结了蛋白回收问题的其他常见原因及解决方案,见下表。
可能原因 |
补救措施 |
蛋白与其他物质共同洗脱 |
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同一层析柱存在上一次运行的交叉污染 |
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可能原因 |
补救措施 |
样本的 pH 值或缓冲条件不正确 |
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层析柱内出现微生物生长 |
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从 IMAC* 填料中剥离金属离子 |
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超出填料结合载量 |
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可能原因 |
补救措施 |
层析步骤前后使用的测定条件不同 |
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分离过程中去除了抑制剂 |
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可能原因 |
补救措施 |
蛋白被蛋白酶降解 |
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样本制备过程中,蛋白被吸附到过滤器 |
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蛋白沉淀 |
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发生了疏水相互作用 |
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对填料的非特异性吸附 |
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蛋白未洗脱 |
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可能原因 |
补救措施 |
缓冲液中的蛋白不稳定或无活性 |
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酶与辅助因子或其他必要成分分离 |
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* SEC = 凝胶过滤层析、
IEX = 离子交换层析、
HIC = 疏水层析、
AC = 亲和层析、
IMAC = 螯和金属离子亲和层析、
CIP = 原位清洁