作者：Shatz W et al.
发表日期：2019年6月
发表期刊：PLoS One
研究背景
聚乙二醇 (PEG) 在生物技术和药物开发领域有着悠久的历史，并且常用在脂质体的纯化中。因为PEG作为药物的递送载体具有许多优势，例如，可以增加溶解度，延长半衰期，并且可以降低免疫原性。到目前为止，许多具有不同链长和分散性的PEG被用于药物的脂质体递送体系中。
衰老相关的眼病是造成失明和视力不佳的最常见的原因之一。往往在治疗时需要通过玻璃体内注射 (IVT) 来输送药物。而这种给药方式通常的药物半衰期小于10天，所以需要频繁给药。所以目前亟需开发一种可以延长药物在眼睛中停留时间的治疗方法。
在本文中，作者报告了一种通过使用抗补体因子D的抗体 Fab片段修饰的PEG脂质体延长药物半衰期的策略。具体来说，作者筛选了结构、长度、几何形状和分支程度不等的PEG分子来包装Fab抗体片段。最终，体外筛选得到的PEG分子包装了治疗性抗体片段后，在猴动物模型上进行药物耐受性和药代动力学的研究，证明表面抗体药物经过PEG包装后在玻璃体内半衰期被有效延长，且无相关不良反应产生。
实验方法
- 抗体片段表达与纯化
通过原核表达系统 E.coli重组表达。细菌破碎上清首先使用亲和层析进行抗体的捕获，使用的是Protein G- Sepharose填料；之后，使用离子交换层析进行抗体片段的精纯，使用的是SP HP填料。 - 抗体片段与PEG的共价偶联
使用Maleimide活化纯化得到的Fab C端的Cysteine，然后与PEG共价偶联。具体来说，将PEG分子置换到pH5的醋酸钠缓冲液中，将Fab片段置换到pH6.5的HEPES缓冲液中，然后将PEG、Fab、Maleimide室温搅拌过夜。对于混合组分，使用S-100的分子筛进行纯化，分离与PEG偶联的Fab片段、未偶联的Fab片段。为了进一步保证脂质体的纯度，使用SP HP填料进行离子交换层析。 - 修饰后脂质体的表征
为了将纯化得到的治疗用脂质体用于进一步的体外及动物实验中，作者使用多种检测手段对脂质体进行表征，包括，SEC-MALS、RP-LCMS、SDS-PAGE等等。脂质体粗提液的制备
首先制备脂质双分子薄膜，然后准备含5 mM钙黄绿素的250 mM Tris-HCl pH 8.0水化缓冲液，将上述水化液转移到制备好的薄膜上，制作囊泡，随后用100 nm的聚碳酸脂膜进行脂质体挤出，制备脂质体粗液。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17547055 | HiTrap Capto Q ImpRes | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 17116501 | HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR | 1 × 120 mL |
| 填料 | 17061801 | Protein G-Sepharose 4 FF | 5 mL |
