作者：Andrew Fultona et al.
发表日期：2015年2月
发表期刊：Journal of Chromatography A
研究背景
单克隆抗体 (mAb) 是增长最快的药物分子之一，其靶向治疗从关节炎、免疫紊乱、传染病到癌症等疾病。由于其独特的应用原理，抗体通常被大量生产。植物，如本氏烟草，由于它们能够以相对快速的方式生产大量生物分子，为生物治疗药物提供了独特的生产平台。然而，由于地面植物组织中存在有毒化合物以及需要处理的大量植物组织，因此从植物中纯化目标蛋白是一项艰巨的任务。
在这里，在对本氏烟草中表达的埃博拉 GP1 蛋白的 mAb 进行色谱纯化之前，开发了一种工艺。该过程包括渗滤步骤和带电的聚电解质沉淀。渗滤步骤显着提高了沉淀效率，将聚电解质的使用量减少了 2000 多倍，同时将去除的天然植物蛋白从 60% 提高到 80%。
实验方法
首先进行表达载体的构建，通过电穿孔的方式进行转导。之后进行阳性克隆的筛选。
之后进行植物的扩大培育，植物总蛋白裂解后离心取上清，PAA沉淀；超滤后PEI沉淀，取上清纯化。
该实验分为两条纯化工艺路线，分别如下图所示：
- 第一步，疏水相互作用层析，使用phenyl sepharose 6 FF 5 mL的层析柱，流速1 mL/min。平衡缓冲液使用25% (w/v) 硫酸铵在 50 mM 磷酸钠 pH 7.0 ，洗脱时用40% buffer A+60% buffer B 线性洗脱。
- 第二步是疏水性电荷感应层析进行精纯，使用MEP HyperCel™柱子，平衡缓冲液使用50 mM Tris–HCl pH 8.0，洗脱用pH 5.0缓冲液进行分步洗脱，并使用 1.5 M Tris-HCl pH 7.0 立即中和 。
在这项工作中，抗 EBV mAb 在本氏烟草中瞬时表达，在纯化之前采用超滤的方法，显著提高了沉淀效率。同时HIC 和 HCIC 串联的纯化方式为mAb提供了一种潜在的替代方法。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17519301 | HiTrap Phenyl FF (HS) | 5 × 5 mL |
| 填料 | 17097310 | Phenyl Sepharose 6 FF (HS) | 25 mL |
