作者:A .Y.-H. TEH et al.
发表日期:2021年1月
发表期刊:GUT MICROBES
研究背景
产肠毒素大肠杆菌 (ETEC) 会导致严重腹泻,在一些国家(LMICs)中,ETEC 是幼儿死亡的主要原因,估计 5 岁以下儿童的死亡率为 300-500,000。 ETEC 也会导致每年大约 1000 万的旅行者腹泻。 系统评价表明30-40% 的旅客可检测到 ETEC腹泻,特别是在流行地区。ETEC 通过受污染的水或食物经口粪途径传播。
目前还没有针对ETEC的商业化产品。因为该疫苗开发具有挑战性,源于抗原多样性。
在这项研究中,作者通过研究单克隆抗 ETEC CfaE 分泌型 IgA 抗体在本氏烟草植物中的表达,以期促进获得 ETEC 被动免疫治疗。虽然抗体产量和纯化需要优化,但抗 ETEC在低成本工厂平台上生产的 SIgA 抗体在功能上与 CHO 相当,并为 LMICs 的被动免疫治疗提供了希望。
实验方法
作者首先进行表达载体的构建,之后进行植物浸染,6天后取叶片,用 3 倍体积的 PBS (pH 8.0)与 0.1% Tween 2制备纯化样本。在捕获阶段,使用Capto L 亲和填料,洗脱液使用0.1 M 甘氨酸-HCl (pH2.7),洗涤后,用 1 M Tris-HCl (pH9.0) 中和。之后抗体用 PBS 0.01% Tween 20 透析并使用 Amicon Ultra-15进行浓缩。对于CHO 细胞表达的68-61 SIgA and dIgA抗体,还需要过HiLoad 26/600 Superdex 200pg柱子精纯。
该纯化过程具体如下:
- 第一步,载体构建及植物侵染扩大,叶片研磨后制备纯化样品。
- 第二步,亲和纯化,使用Capto L 亲和捕获。
- 第三步, 凝胶过滤纯化,使用HiLoad 26/600 Superdex 200pg柱子进行精纯。
产品信息
类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
---|---|---|---|
预装柱 | 17547814 | HiScreen Capto L | 1 × 4.7 mL |
填料 | 17547801 | Capto L | 25 mL |
预装柱 | 28989336 | HiLoad 26/600 Superdex 200 pg | 1 × 320 mL |
填料 | 17104301 | Superdex 200 pg | 150 mL |