作者：Yuichi Imura et al.
发表日期：2021年1月
发表期刊：Scientific Reports

研究背景

蛋白 A 亲和层析已广泛用于实验室规模的纯化和商业化生产。蛋白 A 纯化虽然高效，但是仍然存在一些问题需要解决，例如宿主细胞蛋白残留、DNA残留、聚集体等杂质。此外，洗涤缓冲液在蛋白 A 纯化中对抗体的理化特性尚未充分理解。

本文作者发现了一种新的单克隆抗体纯化方案，只需插入一个额外的捕获步骤后用碱性缓冲液洗涤步骤至常规蛋白A纯化。之后，作者从理化特性、产量和杂质清除方面研究了碱洗对单克隆抗体的影响。碱洗步骤的简单插入可防止抗体发生不可逆聚集，减少游离硫醇和杂质，改善抗体和储存稳定性，并提高产量。这种新方法广泛适用于单克隆抗体的蛋白 A 亲和层析。

总之，本文作者发现了一种新的碱性洗涤方法，具有多种优点，例如提升产量，防止不可逆聚集，减少游离硫醇，杂质减少等。此外，该程序非常简单且用途广泛，因此研究人员可以在研究阶段的小规模纯化中轻松应用这种方法，并且该方法的大规模生产放大也在研究中。

实验方法

作者首先进行哺乳细胞稳转系统的建立，扩大培养之后进行亲和捕获，之后将实验分为两组，一组为常规组，一组为加了碱洗的实验组。实验结束后对样品进行透析和过滤。

该纯化过程具体如下：

1. 第一步，载体构建及细胞稳转扩大培养。
2. 第二步，亲和纯化，使用HiTrap MabSelect SuRe 亲和捕获。柱子用 PBS pH 7.2 洗涤 6 CV。之后用 100 mM 碳酸钠、pH 11.0 溶液进行额外的碱洗 6 CV。随后用 PBS pH 7.2 中和8 CV。100 mM 甘氨酸HCl 缓冲液 pH 3.2 进行洗脱。洗涤后，用 1 M Tris-HCl (pH8.8) 中和。
3. 第三步, 将所有抗体样品透析至 PBS pH 7.2 或 50 mM 柠檬酸盐、150 mM NaCl、pH 6.3 缓冲液。
4. 第四步，使用 0.45 μm PES 过滤器 GD/X（GE Healthcare）过滤样品。

产品信息

Reference
Yuichi Imura et al.Washing with alkaline solutions in protein A purification improves physicochemical properties of monoclonal antibodies，(2021) 11:1827