作者：Tao Wang et al.
发表日期：2024年3月1日
发表期刊：Mabs

研究背景

为了提高抗体的选择性和疗效，本研究开发了一种名为 Gentulizumab（GenSci059）的人源化抗 CD47 单克隆抗体，其通过293E 细胞表达，且表达上清液经 0.22 μm 滤膜过滤，该抗体最终通过 MabSelect SuRe （Cytiva）亲和层析柱进行纯化。该抗体可选择性地与 CD47 结合，有效阻断 CD47/SIRPα 轴信号通路，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，表现出强大的抗肿瘤活性和良好的安全性，有望成为一种有效的癌症治疗药物。

实验方法

抗原表达：构建由人 CD47 细胞外区域和 hIgG1Fc 组成的基因片段并克隆到 pcDNA3.1 载体中，重组载体瞬时转染到 293F 细胞中进行表达，使用ÄKTA蛋白层析系统对表达的抗原进行纯化。

免疫动物：用纯化的抗原对 Balb/c 小鼠进行免疫。收集免疫小鼠的脾脏细胞，然后与 P3X63Ag8.653 骨髓瘤细胞一起进行杂交。融合两周后，收集细胞上清进行 ELISA 和功能检测。

抗体筛选：筛选出阳性杂交瘤细胞系并培养 7 天，收集上清液，然后通过protein A 亲和层析进行纯化。通过综合筛选，从单克隆细胞系中选出了潜力最大的单克隆抗体（克隆编号为 1.43.1）。

抗体人源化：为使小鼠衍生的抗人 CD47 mAb（1.43.1）人源化，将互补决定区（CDR）残基嫁接到人的种系框架上，去除可能的翻译后修饰（PTM）基序，确定了五组合适的框架区（FR）序列，对 25 种抗体的表达量和结合特性进行了评估。

抗体制备：在 Freestyle 培养基中使用 293E 细胞瞬时表达最终候选抗体。上清液经 0.22 μm 滤膜过滤，然后通过 MabSelect SuRe （Cytiva）亲和层析柱。筛选出的人源化抗体被命名为 Gensci059。纯化后的抗体保存在 4 ℃以备后续使用。

抗体评估：使用流式细胞仪和表面等离子体共振（SPR）方法评估GenSci059 与 CD47 的结合能力，通过竞争性 ELISA 试验评估Gen- Sci059 对 CD47-SIRPα 相互作用的抑制作用。利用体外巨噬细胞模型和体内患者异种移植（PDX）模型评估 GenSci059 的抗肿瘤活性。使用血细胞进行结合试验以评估 GenSci059 的安全性。最后，在非人灵长类动物身上进行了毒性研究，以评估 GenSci059 的潜在风险。

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Reference
Gentulizumab, a novel anti-CD47 antibody with potent antitumor activity and demonstrates a favorable safety profile