作者：Xiujuan Chen et al.
发表日期：2020年4月
发表期刊：Protein Expression and Purification

研究背景

非对称性双抗通常由两个不同的半抗组成。它们来自具有不同特异结合能力的亲代抗体。虽然目前已经开发出多种蛋白质工程方法，以促进四条肽链的正确配对，但是半抗仍然是双抗工艺当中最常见的产品相关杂质之一，因为很难保证两种半抗等量地表达。
半抗由一个重链和一个轻链构成，是抗体分子结构的一半，是双特异性抗体生产当中常见的副产品。在大多数情况下，半抗是主要的产品相关杂质。由于半抗分子只含有一个Fc区域，所以它与蛋白A的结合能力要比拥有全Fc区域的双抗要弱。事实上，蛋白A层析确实能在线性pH梯度洗脱下分离半抗和双抗分子，但并不彻底。额外的实验表明，向流动相中添加盐，可以极大提升层析实验的分辨率，这对于下游工艺的整体稳定性具有重要的意义。

实验方法

MabSelect SuRe LX填料装入Tricorn 5/150层析柱中，柱体积约为3 mL。将细胞培养14天后的收获液经过两轮离心得到样品。在条件筛选阶段，将30 mg蛋白上样至层析柱当中，流速设置为180 cm/h，分别进行梯度洗脱和线性洗脱。此外，实验还筛选了不同上样量（10、20、30 mg蛋白/mL填料）对于半抗分离能力的影响。进行层析实验后，使用Bis-Tris凝胶电泳和SEC-HPLC分析结果。
结果显示，梯度洗脱不能将半抗和双抗分离。线性洗脱下，分离效果有了轻微的提升，并且向流动相当中加入盐（500 mM氯化钠或者300 mM氯化钙），会使分辨率有进一步的提高。

产品信息

Reference
Removing half antibody byproduct by Protein A chromatography during the purification of a bispecific antibody - PubMed (nih.gov)