作者：Esparvarinha M, et al.
发表日期：2019年9月
发表期刊：Veterinary Research Forum
研究背景
免疫球蛋白广泛参与宿主免疫反应，免疫球蛋白含有两条相等的重链和两条相等的轻链，它们通过二硫键连接形成四聚体结构。在哺乳动物免疫系统中，轻链由κ或λ两种亚型组成。在人类中，每个浆细胞只产生一种链类型。在正常情况下，淋巴系统每天会产生大约500毫克游离轻链 (FLC) ，随后通过肾脏分泌和分解代谢。这些链是免疫球蛋白合成的产物，并以微量释放到循环系统中，例如血清、脑脊液、尿液等。
本研究的目的是在兔体内产生针对人κ轻链的抗体，生产具有高亲和力、具有效益的针对kappa轻链的IgG，以用作诊断剂。
实验方法
患者身上提取外周血样品，沉淀后将等体积的血清和饱和硫酸混合。离心后用50%饱和硫酸铵溶液与PBS处理，将上清液加载到DEAE-Sepharose上进行离子交换层析，以1.00-2.00 mL/min的流速用Tris-HCl缓冲液平衡，并用Tris-HCl缓冲液洗脱，得到纯化的lgG多抗。
通过多抗IgG的还原和烷基化制备了游离的κ和λ分子。首先通过凝胶过滤分离重链和轻链。使用Sephadex G-100柱在pH 7.5的0.1 M Tris缓冲液中进行凝胶过滤。用pH 7.5的Tris缓冲液 (0.10 M)平衡柱子，然后以1.00- 1.50 mL/min的流速上样。洗脱后用SDS-PAGE评估纯度。
随后用protein L层析柱分离κ和λ分子。在与protein L偶联的柱上进行亲和层析以分离kappa轻链。层析柱用pH 7.4的PBS以1.00 mL/min的流速平衡。 上样后，用PBS洗杂。 最后用pH 2的0.1 M甘氨酸-HCl洗脱结合的人κ轻链。 酸性部分立即用1 M Tris中和。
用纯化的kappa轻链和佐剂免疫兔子，通过离子交换色谱法在DEAE-Sepharose柱上纯化兔抗IgG kappa轻链。用pH 8.1的40 mM Tris-磷酸缓冲液平衡柱子，IgG 用pH 8.1的75 mM Tris-HCl缓冲液洗脱。通过SDS-PAGE评估纯度，并通过考马斯亮蓝G-250染色在凝胶中观察纯化的抗体。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17547855 | HiTrap Protein L | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17544310 | Capto DEAE | 25 mL |
| 填料 | 17006001 | Sephadex G-100 | 100 g |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
