作者：Panpan Zhao et al.
发表日期：2014年11月
发表期刊：Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy
研究背景
IgY是鸟类、爬行动物类及肺鱼类动物血液中的抗体主要存在形式，其包括两条轻链及两条重链。目前市面上缺少针对这些IgY的特异性抗体，这导致在一些研究中IgY的检测和鉴定非常困难。
本研究中使用了E.coli原核表达系统来表达鹅IgY Fc区域的rGoIgYCu3/Cu4蛋白，之后使用其免疫兔子。最后使用Protein G Sepharose以亲和层析的方式来纯化抗血清，即可得到针对于IgY Fc区域的多抗。得到多抗使用WB鉴定，结果显示其对于rGoIgYCu3/Cu4以及天然的IgY都有高度的特异性，同时又对不同物种来源的IgY均具有特异的活性。本研究制备的多抗可以用于IgY相关研究中的WB和ELISA等免疫分析方法中。
本研究中首先通过载体构建成功构建了表达GoIgYCu3/Cu4蛋白的质粒，并通过大肠杆菌E.coli进行重组表达。蛋白表达纯化后，利用纯化的蛋白对兔子进行免疫后采血，得到的抗血清使用Protein G Sepharose纯化并得到多抗，之后对多抗进行性质鉴定。
实验方法
利用构建好的E.coli重组表达rGoIgYCu3/Cu4蛋白，表达后进行SDS-PAGE鉴定；鉴定后直接通过挖胶的方法得到纯的rGoIgYCu3/Cu4蛋白，将其溶于PBS中，并用纯化后的rGoIgYCu3/Cu4蛋白免疫兔子。免疫后得到的兔抗血清使用间接ELISA的方法鉴定血清中的抗体滴度，结果显示滴度可达1:204,800；最后使用Protein G Sepharose纯化抗血清得到多抗，利用SDS-PAGE鉴定纯化后的多抗。结果显示纯化的多抗既对重组蛋白及天然来源的GoIgY都有特异的活性，又对不同物种来源的天然来源的GoIgY同样有特异的活性。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17040503 | HiTrap Protein G HP | 5 × 5 mL |
| 填料 | 17061802 | Protein G Sepharose 4 FF | 25 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
