作者：Shuangshuang Liu, et al.
发表日期：2017年4月
发表期刊：Molecular medicine reports
研究背景
CD147是一类可溶的高度糖基化的跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。有报道在多种人肿瘤细胞表面CD147均有高水平表达。因此可溶性CD147可作为特定肿瘤的肿瘤标志物。ELISA夹心法是在分析可溶性抗原时常用的一种有力工具。ELISA夹心法如果使用的两个抗体均为单抗，容易造成由于抗体识别表位交叉或重叠导致的检测误差，而多抗中由于含有了识别相关抗原尽可能多的表位的不同抗体，使用一个多抗可以尽量的避免双单抗试剂的误差问题。本研究旨在找到可用于ELISA夹心法分析的高特异性针对人CD147的多抗。
实验方法
- 免疫用抗原的表达及纯化
为了保证得到的多抗为针对人源CD147抗原，使用真核表达CHO细胞系统全人源的CD147抗原，在抗原表表达时，进行CD147-Fc融合表达，通过切向流微滤收集和分离培养物悬浮液。
使用HiTrap rProtein A层析柱通过亲和层析纯化CD147-Fc重组蛋白。HRV 3C蛋白酶切割Fc片段，通过使用HisTrap的Ni2+亲和层析柱纯化混合物，然后使用HiTrap rProtein A进行亲和层析，以去除残留的Fc片段和HRV 3C蛋白酶，因为它们也具有His标签。最后通过超滤装置对洗脱液进行脱盐和浓缩。BCA法测定纯化的CD147的浓度，12% SDS-PAGE分析样品。 - 兔抗血清的制备及多抗的纯化
纯化后的CD147抗原对兔子进行免疫，完成免疫过程后对兔子进行采血，每只兔子收集到将近100 mL的血液，经过离心后得到约30 mL的血清。血清经过硫铵沉淀进行初步纯化后使用免疫亲和层析柱CNBr‑activated sepharose 4B纯化多抗。最后分别通过10% SDS-PAGE和间接ELISA分析抗CD147多抗的纯度和反应性。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17040303 | HiTrap Protein A HP | 5 x 5 mL |
| 预装柱 | 17524802 | HisTrap HP | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17043002 | CNBr-activated Sepharose 4B | 250 g |
| 填料 | 17526801 | Ni Sepharose HP | 25 mL |
| 填料 | 17549801 | MabSelect PrismA | 25 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
