作者：Zegota MM et al.
发表日期：2018年8月
发表期刊：Bioconjugate Chemistry
研究背景
近年来，在生理条件下以定点方式修饰天然蛋白质方面取得了很大进展。然而，将成功修饰的蛋白质与其天然前体分离可能具有挑战性，特别是如果连接了一个小的取代基。因此，Davis 及其同事首次提出了“标记和修改”策略（Tag and Modify Strategy）。例如，可以利用生物素-（链霉素）亲和素 或金属-配体 相互作用并在新引入的反应位点引入功能。尽管如此，许多目前使用的结合标签仍存在固有局限性，例如体积庞大， 结合常数太低，不允许进一步修饰或结合太强， 在洗脱过程中需要苛刻的条件。因此，非常希望引入一种小的反应性标签，它既可用作亲和标签，又可用作进一步修饰的反应性手柄，并允许在受控的生理条件下进行切割。
硼酸(boronic acid (BA) tag) 会基于动态共价键形成进行生物共轭，从而提供弱但稳定的共价键，可以作为在 pH 控制条件下可裂解的纯化和修饰位点。 BA 因其小尺寸、生物正交性、键稳定性和易与diol基团反应的可逆性而具有巨大的优势。 BA 与diol的相互偶联，可以在细胞培养基中保持完整，但可以通过轻微的 pH 变化来可逆地解开。
所以在本研究中，作者使用BA tag来连接一种模式蛋白-溶菌酶和荧光染料，探索它是否能够很好地满足”Tag and Modify”策略，从而完成在生理环境下受控的解聚。
实验方法
作者为了将BA Tag与溶菌酶和荧光染料偶联，首先需要制备BA Tag标记的溶菌酶。作者通过化学有机合成制备活化了的BA Tag，然后通过二硫键将溶菌酶与BA Tag偶联。第二步是纯化BA Tag标记了的溶菌酶，由于BA Tag可以与填料基架agarose和dextran特异性吸附，所以通过脱盐柱去除未连接的BA Tag；通过亲和层析进一步分离未连接的溶菌酶。第三步是通过SHA化学偶联将 BA Tag与荧光染料偶联。最后，对BA Tag偶联复合物的功能验证，验证偶联复合物可以动态、pH 控制的方式结合并释放荧光染料分子。例如，酸化至pH 6时，溶解的生物偶联物可以对轻微的 pH 变化迅速作出反应。
产品信息
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|
| 28990944 | Superdex 200 Increase 10/300 GL | 1 × 24 mL |
