作者：Jiahui Guo et al.
发表日期：2021年10月
发表期刊：Journal of extracellular vesicles
研究背景
SEC分子排阻技术是在各种不同来源的外泌体的分离中被广泛使用的技术，SEC实验过程中需要通过不同组分的收集以实现杂质的去除。在本研究中，建立了一种对于如FBS或者人血清以及细胞培养上清等样品均可以使用的二分法SEC外泌体分离技术。在该方法中，只需要两个组分的分别收集就可以得到高纯度的外泌体样品。
实验方法
- 基于Sepharose CL-6B的二分法SEC的建立
为了建立操作简单，分辨率高的SEC外泌体分离方法，分别使用Sepharose CL-2B, Sepharose CL-4B, Sepharose CL-6B 装柱， 对装柱体积和洗脱的策略分别进行测试，最终选定Sepharose CL-6B, 装柱20 mL,两个组分体积分别为8 mL（收获外泌体组分）和16 mL（收获蛋白组分）。 - 使用二分法SEC对不同的样品中的外泌体进行分离
根据样品来源的不同，对血清或者收集的细胞上清进行处理后，使用二分法SEC进行外泌体的分离。分离后对收集到的外泌体组分进行鉴定。 - 使用二分法SEC分离FBS样品中的外泌体组分
使用二分法SEC对FBS样品的外泌体组分进行分离，结果显示，此方法在组分一中外泌体的回收率可达（93.8 ± 13.8）%，层析柱重复使用10次的情况下可以保证较好的外泌体分离的纯度和回收率。 - 使用二分法SEC分离人血清中的外泌体组分
使用二分法SEC对人血清中的外泌体组分进行分离，结果显示1mL的人血清样品使用二分法SEC可在22 min完成外泌体分离过程，1 mL样品可回收（3.4 ± 1.8）×1012 颗粒，回收的样品中每μg蛋白对应的颗粒数为 （1.2 ± 0.9）× 109 particles/μg protein。 - 使用二分法SEC分离细胞培养上清中的外泌体
为了验证二分法SEC对不同来源的外泌体样品的适用性，使用该方法分离SW620细胞培养上清中的外泌体组分。结果显示通过二分法SEC可以将细胞上清中的组分进行较好的分离，在第一个组分中可以回收到（5 ± 0.8）×1011 particle/mL数量的颗粒，且这些颗粒95%可以被1% Triton X-100 破坏，说明这些组分确实为外泌体颗粒。该结果显示二分法SEC也可以很好的应用于各种细胞培养上清中的外泌体分离。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 填料 | 17016001 | Sepharose CL-6B | 1 L |
