作者：Santos T, et al.
发表日期：2016年5月
发表期刊：Separation and Purification Technology
研究背景
在富含G的DNA区域中形成G四联体可以通过转录诱导，并在大肠杆菌中转录的质粒中形成。超螺旋（sc）拓扑比松弛（oc）或线性化（ln）质粒亚型更能证明G环。因此，本文介绍了不同的纯化策略，以有效地从澄清的大肠杆菌裂解物中存在的其他质粒拓扑和宿主污染物中纯化pPH600sc亚型。为了实现这一目的，通过将l-酪氨酸和l-色氨酸连接到环氧活化的Sepharose CL-6B上，制备了两种亲和载体，l-酪氨酸-Sephrose和l-胰蛋白酶-Sephroses，并对其进行了进一步表征。商业载体l-精氨酸琼脂糖凝胶也用于纯化sc pPH600，因为它已经被有效地应用于使用温和的结合和洗脱条件分离其他质粒的sc同种型。
研究方法
活化后的Sepharose CL-4B载体与L-酪氨酸和L-色氨酸载体配体结合，形成相对应的亲和层析填料。
大肠杆菌发酵菌体经碱裂解法后得到粗提的质粒溶液。市售L-精氨酸柱子作为对照组。市售L-精氨酸柱子用10mM Tris-HCl，110mM NaCl(pH8.0)平衡上样后，用10mM Tris-HCl，500mM NaCl(pH8.0)做4.8CV的线性洗脱，收集样品。Sepharose CL-4B-L-色氨酸柱子用100mM HEPES，2.65M （NH4）2SO4 (pH8.0)平衡上样后，用100mM HEPES (pH7.4)做4.4 CV线性洗脱，收集样品。Sepharose CL-4B-L-酪氨酸柱子用100mM HEPES，2.25M （NH4）2SO4 (pH8.0)平衡上样后，用100mM HEPES (pH7.4)做3 CV线性洗脱，收集样品。
比较三者之间的差异。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 填料 | 17071001 | DEAE Sepharose CL-6B | 500 mL |
