作者：Ryan P. McNamara et al.
发表日期：2018年11月
发表期刊：Journal of extracellular vesicles
研究背景
外泌体和很多的生理病理过程相关，包括免疫反应、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中枢神经系统相关的疾病、癌症进程等，因此常用于疾病机理研究。加上外泌体已经被报道存在于所有的体液（血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等）中，被用于基于液体活检的体外诊断领域。外泌体携带的蛋白、代谢产物、核酸等可以有效地调节靶细胞的生物学状态，进而促进或遏制疾病进程，由此也促进了外泌体应用于治疗领域，包括神经退行性疾病、免疫调节、组织修复和癌症等，部分药物已进入临床试验阶段。另外，外泌体还可以用于工程化的包裹药物，包括 siRNAs、反义寡核苷酸、化疗药物和免疫调节剂等，用于靶向给药。
McNamara RP 等借鉴 TFF/Capto Core 700 外泌体纯化的应用，继续将其推广到悬浮细胞（人肿瘤细胞株 BCBL-1）以及血浆样品中，并将处理量提高到 400 mL。
实验方法
- 粗提液的制备
将来源于BCBL-1的悬浮细胞经过离心去除细胞、碎片、更大囊泡，或者用Ficoll-Paque Plus将人血浆进行分离并取上层血浆，离心去除血小板、凝血因子和生物大分子。将上述样品用0.22 μm滤膜进行过滤。 - 样品的进一步制备
用TFF进行浓缩和洗滤，然后进行PEG沉淀。在沉淀后的上清中加入RNase去除non-EV encased RNA。 - 层析纯化
将经过前期处理的样品用HiTrap Capto Core 700进行上柱纯化。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 29400461 | HiTrap Capto Core 700 | 1 × 1 mL |
| 填料 | 17548101 | Capto Core 700 | 25 mL |
