作者：Sara Cardoso et al.
发表日期：2018年10月
发表期刊：Separation and Purification Technology

研究背景

由于pDNA的大尺寸和复杂形状，当在阳性模式下操作时，使用商业色谱珠通常导致产率低和结合能力低。克服这一限制的另一种选择是设计能够在负模式下有效操作的色谱配体树脂系统，其中宿主杂质（特别是低分子量RNA）被有效地捕获并与目标pDNA分离。在这项工作中，精氨酸氨基酸和二精氨酸肽（精氨酸-精氨酸）被固定在琼脂糖树脂中，并对细菌细胞裂解物中pDNA的负色谱纯化进行了评估。

研究方法

将菌体裂解后，经碱裂解法制备粗提的质粒DNA。粗提的质粒DNA上样到提前制备好的Sepharose 4B精氨酸柱子上，柱子使用20mM Tirs-HCl, 10mM EDTA(pH 7.0)平衡，上样后，用20mM Tirs-HCl, 10mM EDTA，1MNaCl(pH 7.0)做线性洗脱。

离子交换层析得到的洗脱液由HIC 15 Source PHE PE 柱进行反向层析，以20mM Tirs-HCl, 1.5M（NH4）2SO4(pH 8.0)进行平衡，上样后，使用20mM Tirs-HCl(pH 8.0)进行洗脱，计算pDNA的回收率。

产品信息

Reference
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1383586617339059