作者：Tiago Matos et al.
发表日期：2014年4月
发表期刊：J. Mol. Recognit.

研究背景

多模式层析被广泛用于蛋白质的分离，与传统的单模式配基相比，这些配基通常可以实现更高的选择性。多模式配基通常是结合两种或者两种以上的配基模式，比如离子和疏水相互作用。几种基于氨基酸的配基已被用于 pDNA分离，并且这些树脂具有类似MMC的行为。

在这项研究中，作者研究了 Capto Adhere，这是基于HIC和AEX类型相互作用的最新MMC填料。Capto Adhere表现出非常强的核酸结合，它最初被设计为用于单抗纯化的精纯步骤。鉴于该填料对于核酸的强结合能力，作者尝试大肠杆菌裂解液直接使用Capto Adhere进行核酸纯化。同时作者对于纯化的条件进行了一系列的优化和摸索。

实验方法

首先进行细菌生长和pDNA生产。所有实验均以大肠杆菌菌株DHα5为宿主用于生产pUC18（2686 bp）。在37°C的摇瓶（250rpm）中，使用补充有100μg/ ml氨苄青霉素的培养基进行生长过夜。发酵后，在后期对数阶段通过离心收获细胞，5445 g（20min，4°C），并将沉淀储存在-20°C后再进一步使用。

接着进行碱性裂解，将含有pDNA的最终沉淀溶解在10mM Tris-HCl（pH 8.0）缓冲液中。所有样品均在-80°C下储存直至使用。对照质粒提取，作者使用了质粒提取试剂盒，按照说明书的方式进行提取。

接下来，作者使用ÄKTA purifier 设备，流速为 1.0ml/min；实验过程中监测260nm的UV值。根据厂家说明装填2.5ml Capto Adhere层析柱。实验过程详细如下：结合缓冲液10mM Tris-HCl （pH 8.0）平衡12CV，进样 100 μl 样品；进样后，使用相同的缓冲液清洗5CV。梯度洗脱阶段，首先使用1.0M的NaCl（10mM Tris-HCl，pH 8.0）洗脱5CV，然后用2.0M NaCl（10mM Tris-HCl，pH 8.0）再洗脱5CV。所有溶液在实验前均使用0.45um的膜进行过滤。收集到的样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。

本文给出的结果表明，使用 Capto Adhere 可以高效的从大肠杆菌中分离 pDNA。并且可以在一系列不同的pH值和样品浓度下实现分离。核酸对配基的识别非常强，这主要是由于配基上的疏水性苯基。该部分阻止了pDNA的sc和oc形式的分离。该填料对于去除几种污染物也非常有效，包括 RNA、gDNA、蛋白质和内毒素。因此，这种MMC方法非常适用于面向DNA疫苗和基因治疗的药物产品。

产品信息

Reference
Tiago Matos et al. Plasmid DNA purification using a multimodal chromatography resin. J. Mol. Recognit. 2014; 27: 184–189