作者：Jorge M Montfort-Gardeazabal et al.
发表日期：2020年10月
发表期刊：Protein Expression and Purification
研究背景
已从暴露于细菌感染的动物器官（皮肤、粘膜等）中分离出各种抗菌肽。已发现一系列β-防御素在小鼠的附睾中表达，在那里它们作为抵御细菌感染的防线。β-防御素是在几种动物物种中发现的小阳离子肽，具有抗多种感染（细菌、真菌、病毒）的抗菌性能。其中一种防御素Bin1b是一种小肽，由45个氨基酸组成，分子量为5.21 kDa。Bin1b具有良好的特征，并已显示出对革兰氏阴性杆菌大肠杆菌具有抗菌活性。
之前有研究表明重组Bin1b已在大肠杆菌中表达，融合蛋白已获得不同程度的成功。但结果不是很理想。本文提出使用SmbP和CusF3H+作为融合蛋白亲和标签来表达和纯化β-防御素Bin1b，随后去除亲和标签以获得具有抗菌活性的生物活性分子。
研究方法
菌体均质化后上样至Histrap FF 亲和层析柱上，亲和层析柱用50 mM Tris-HCl，500 mM NaCl (pH = 8.0)平衡。用50 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，200 mM咪唑 (pH = 8.0)洗脱5 CV。取样进行SDS-PAGE验证。50 mM Tris溶液中透析过夜。
透析后用Hitrap Q HP柱进行精纯。阴离子交换住用50 mM Tris-HCl (pH = 8.8)平衡后上样，用50 mM Tris-HCl，1 M NaCl (pH = 8.8)做50 CV的线性洗脱，收集UV 280 nm下的吸收峰。随后使用SDS-PAGE电泳分析上清液以确认融合蛋白。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17531901 | Histrap FF | 5 × 1 mL |
| 填料 | 17531801 | Ni Sepharose 6 FF | 25 mL |
| 预装柱 | 29051325 | Hitrap Q HP | 1 × 1 mL |
| 填料 | 17101401 | Q Sepharose HP | 75 mL |
