作者：Erik Vernet et al.
发表日期：2020年1月
发表期刊：Protein Expression and Purification
研究背景
胰高糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）是一种主要由肠道L细胞所产生的激素，属于肠促胰素（incretin）是治疗Ⅱ型糖尿病的重要靶点之一，具有促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌、延迟胃排空等作用。GLP-1治疗效果明显，用药安全性高。本文介绍了Xaa-Pro二肽基氨基肽酶对胰高血糖素进行切割，实现N末端延伸提高产量的一种方法，利用生物技术制备了Xaa-Pro二肽基氨基肽酶的野生型和突变体对胰高糖素样肽-1进行切割的研究内容。
研究方法
Xaa-Pro-DAP菌体破碎离心后，上清溶液在经 50 mM 磷酸盐，50 mM NaCl，30 mM 咪唑(pH 8.0)平衡后的Histrap FF Crude层析柱上上样。用50 mM 磷酸盐，50 mM NaCl，300 mM 咪唑(pH 8.0)做20 CV的线性洗脱。然后将亲和层析后的蛋白样品上样至16/60 Superdex 200 pg的凝胶过滤层析柱上，用50 mM 磷酸盐,50 mM NaCl(pH 7.5)的Buffer进行洗脱。
Gly-Pro-GLP-1(7-37)均质化后，使用Hitrap-SP-FF阳离子交换柱进行层析。用25 mM Tirs ，1mM EDTA (pH7.5)平衡上样，用25 mM Tirs ，1M NaCl，1mM EDTA (pH7.5)做50 CV的线性洗脱。得到的Gly-Pro-GLP-1(7-37)与Xaa-Pro-DAP进行反应，反应后的产物由LC-ESI-MS进行验证。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 29048631 | Histrap FF Crude | 1 × 1 mL |
| 填料 | 17531801 | Ni Sepharose 6 FF | 25 mL |
| 预装柱 | 28989335 | HiLoad 16/60 Superdex 200 pg | 1 × 120 mL |
| 填料 | 17104301 | Superdex 200 pg | 150 mL |
| 预装柱 | 17505401 | Hitrap SP FF | 5 × 1 mL |
| 填料 | 17072910 | SP Sepharose FF | 25 mL |
Xaa-Pro DAP
Gly-Pro-GLP-1(7-37)
