作者：Hu Hou et al.
发表日期：2012年2月
发表期刊：Food Chemistry

研究背景

为了从阿拉斯加鳕鱼框架（APF）水解物中制备免疫调节肽并用脾淋巴细胞增殖试验研究了水解物的免疫调节活性。水解产物的活性达到最高当DH在15%至18%之间时。表现出最高活性的肽级分进一步使用离子交换色谱、凝胶过滤色谱和RP-HPLC纯化。肽使用纳米LC ESI质谱法鉴定。最后，三种免疫调节肽是并且氨基酸序列为Asn-Gly-Met-Thr-Tyr、Asn-Gly Leu-Ala-Pro和Trp-Thr，分别地淋巴细胞增殖率分别为35.92%、32.96%和31.35%20lg/ml纯化肽。因此，结果表明APF蛋白胰蛋白酶水解产物可作为具有免疫调节活性的多肽来源。为免疫调节肽的制备提供了科学依据。

研究方法

鳕鱼骨架经120 ℃高压蒸煮30分钟，软化骨干，然后在高速组织均质机中均质。将蛋白浓度为25 g/l的蛋白匀浆与24 U/mg蛋白的胰蛋白酶混合，初始pH调至8.0。水解在50 ℃ ，在120转/分的摇水浴培养箱中进行290分钟在100 ℃加热混合物5分钟，灭活蛋白酶。8000g, 4 ℃离心10 min，收集上清。

首先使用SP Sephadex阳离子交换柱捕获目标物。层析柱用20 mM NaAc, pH 4.0缓冲液平衡柱子后上样，用平衡液洗杂后，用20 mM NaAc , 1M NaCl, pH 4.0缓冲液以0.8ml/min线性洗脱，收集器以6.0 min为间隔收集馏分。

将SP Sephadex阳离子交换柱上样至Sephadex G-25分子筛柱子，流速0.8ml/min，收集UV220nm下紫外吸收峰。

最后将过完分子筛的样品上扬至RP-HPLC 反相柱，

洗脱液：用0.1%三氟乙酸的5-30%乙腈洗脱液线性洗脱，收集UV220nm下紫外吸收峰

产品信息

Reference
https://www.scholarmate.com/A/2UvIJz