作者:Ling Qin et al.
发表日期:2022年4月
发表期刊:Marine Drugs
研究背景
硫酸化多糖不仅是细胞壁的重要组成部分,也是一种具有多种生物活性的重要成分。目前,硫酸化多糖作为营养成分或治疗剂被广泛应用于食品和制药行业。海藻,含有丰富的营养物质和生物活性物质。海藻中的多糖则具有抗肿瘤、免疫调节、抗凝血、抗氧化、抗炎等多种生物学活性。褐藻多糖几乎没有副作用,在此前的文献中已被证明是潜在的海洋天然候选药物。本工作从褐藻D. Antarctica中分离、纯化得到褐藻多糖,并通过甲基化分析和核磁共振光谱分析确定了其结构特征,即褐藻多糖是一种硫酸化多糖,主要由岩藻糖和硫酸基团组成。同时评估了其潜在的体外免疫调节活性:包括淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬、NO产生和NK细胞体外细胞毒性。
实验方法
将500 g的褐藻粉末用95%乙醇以1:5 (w/v)的比例脱脂。然后将褐藻粉末用5 L蒸馏水在70°C下提取3小时,提取物以5000 rpm的转速离心10分钟。此步骤重复3次。合并上清液后进行减压浓缩;接下来,将上清液用纤维素膜 (截留分子量3.5 kDa)在室温下用蒸馏水透析。回收部分用95%乙醇沉淀,使乙醇终浓度为75%。得到的沉淀物用100%乙醇和丙酮洗涤以去除多余的水分,然后将得到的粗多糖在40°C下干燥。最后将干燥的多糖溶解在蒸馏水中并与3 M CaCl2混合,以5000 rpm的速度离心10分钟,取上清液冻干,即获得了粗制的褐藻多糖命名为DAP。
粗制褐藻多糖DAP接下来通过Q Sepharose Fast Flow 层析柱 (30 cm × 3.5 cm)进行第一阶段的纯化,用逐步梯度增加的NaCl溶液 (0、0.5、1.0 和 1.5 M)进行洗脱。收集用1.5 M NaCl洗脱的级分,接下来在Sephacryl S-300 HR层析柱 (100 cm × 2.5 cm)上进一步纯化。用0.2 M NH4HCO3洗脱,将洗脱液中主要的多糖组分合并、脱盐、冷冻干燥并命名为褐藻多糖DAP4。
随后对收集得到的样品褐藻多糖DAP4进行单糖组成测定,分子量测定,甲基化分析及核磁解析等,揭示DAP4的多糖结构。同时对DAP4多糖组分进行了一系列免疫调节活性的研究。
产品信息
类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
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预装柱 | 11001303 | HiTrap Capto Q | 5 x 5 mL |
填料 | 17051010 | Q Sepharose Fast Flow | 25 mL |
填料 | 17531610 | Capto Q | 25 mL |
填料 | 17059910 | Sephacryl S-300 HR | 150 mL |
空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |