作者：Datong Hu et al.
发表日期：2021年12月
发表期刊：Molecules
研究背景
瓦松以其免疫调节，抗癌，抗炎和抗氧化活性而闻名，在中国被用作药用植物已有1000多年的历史。此外在糖尿病大鼠中，将瓦松与其他草药结合使用后表现出了神经保护活性。中国药典 (2020年版)记载提取物具有抗炎和促进伤口愈合的作用。此前其化学成分的研究表明，存在糖类、类黄酮、有机酸、甾醇和三萜等成分，而其中多糖是植物和动物的重要生物活性成分，不同结构的多糖表现出不同的生物学功能。在这项研究中，从瓦松中分离出了一种新的多糖OFP，并根据分子量和单糖组成进行了相关分析。随后使用FT-IR光谱，甲基化分析和NMR光谱阐明了OFP的结构表征。最后使用SEM和AFM进行多糖的形态学分析。此外，在RAW264.7细胞中通过测量炎症因子分泌情况和二甲苯诱导的小鼠耳肿胀程度评估了OFP的抗炎活性。
实验方法
新鲜的瓦松粉碎后在石油醚中脱脂，然后在无水乙醇中预提取并去除色素、脂质和单糖等小分子杂质。干燥后在80°C蒸馏水中回流萃取2小时，重复两次，合并所得溶液并浓缩。加入95%乙醇以达到80%的最终乙醇浓度后多糖会被析出，再将多糖沉淀溶解后用Sevage试剂反复多次除去蛋白。最后装入处理过的透析袋 (截止值：3500 Da)中，用蒸馏水透析后冷冻干燥，即得到瓦松多糖的粗品。
粗多糖随后通过使用DEAE纤维素 52层析柱 (4.7 cm × 50 cm)和Sephadex G-75层析柱 (1.7 cm × 80 cm)进行纯化。第一阶段以1.0 mL/min的流速，分别使用0.1 mol/L NaCl、0.3 mol/L NaCl和0.5 mol/L NaCl溶液在DEAE纤维素 52柱上洗脱，苯酚-硫酸法用于在490 nm处监测洗脱液中多糖的洗脱情况。收集、浓缩、透析和冷冻干燥洗脱液完成第一步纯化。随后将冷冻干燥后的多糖使用Sephadex G-75色谱柱进行第二步纯化，用蒸馏水以流速0.5 mL/min洗脱，使用苯酚-硫酸法在490 nm处监测多糖的洗脱情况。最终将纯化的洗脱液冷冻干燥后，得到高纯度的瓦松多糖OFP。
随后对收集得到的样品瓦松多糖OFP进行单糖组成测定，分子量测定，甲基化分析及核磁解析等，揭示OFP多糖结构。同时对OFP多糖组分进行了免疫活性研究。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28916540 | HiTrap Capto DEAE | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17070910 | DEAE Sepharose Fast Flow | 25 mL |
| 填料 | 17544310 | Capto DEAE | 25 mL |
| 填料 | 17005001 | Sephadex G-75 | 100 g |
| 空柱 | 28988946 | Column XK 16/70 | 16/70 |
